一文读懂慢病毒与质粒，来学！

慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种，它能够将靶基因导入到一些较难转染的细胞，如原代细胞等，并且将靶基因随机整合到宿主的基因组中，从而大大增加了转染效率，并且能够在细胞系中稳定表达若干代，可以进行稳转细胞株的筛选。

慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。

一、什么叫质粒

质粒(Plasmid)是附加到细胞中的非细胞的染色体或核区DNA原有的能够自主复制的较小的DNA分子；一般来说，质粒的存在与否对宿主细胞生存没有决定性的作用；它是基因工程最常见的运载体。

根据它们所带有的基因和赋于宿主细胞的特点分为六种不同的类型：

种类	功能
抗性质粒	可使宿主菌对某些抗菌素产生抗性
致育因子	可以通过接合在供体和受体间传递遗传物质
Col质粒	带有编码大肠杆菌素的基因
降解质粒	编码一种特殊蛋白，可使宿主菌代谢特殊的分子
侵入性质粒	使得宿主菌具有致病的能力
隐秘质粒	不显示任何表现类型，主要通过物理方法才能发现

二、什么叫慢病毒载体

 慢病毒载体，指以人类免疫缺陷病毒-1 (H IV-1) 来源的一种病毒基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。慢病毒载体直接用于宿主细胞的感染，目的基因进入到宿主细胞之后，经过反转录，整合到基因组，从而高水平地表达效应分子。

 

 

三、质粒的构建

四、慢病毒载体构建及包装流程

慢病毒包装系统包括：2个包装质粒以及1个转移质粒，将这些质粒共转染包装细胞。2个包装质粒分别为：Gag/Pol表达质粒和Rev表达质粒。

 

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1、慢病毒过表达质粒载体的构建

设计上下游特异性扩增引物，同时引入酶切位点，PCR从模板（CDNA质粒或者文库）中调取目的基因CDS区，连入T载体；将CDS区从T载体上切下，装入慢病毒过表达质粒载体。

2、慢病毒干扰质粒载体的构建

合成siRNA对应的DNA颈环结构，退火后连入慢病毒干扰质粒载体

3、慢病毒载体的包装与浓缩纯化

制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒，4种质粒载体分别进行高纯度无内毒素抽提，共转染293T细胞，转染后18h 更换为完全培养基，换液30h后，收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液，病毒上清液通过超离心浓缩病毒。

五、质粒、慢病毒的应用

质粒的应用：

1、应用于基因治疗，如质粒DNA基因治疗药物（以质粒DNA为载体的基因治疗产品）；2、外源基因的表达；3、基因工程：①微生物基因工程；②植物基因工程；③动物基因工程。

慢病毒的应用：

1、获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的基因治疗；2、神经系统疾病的基因治疗；3、血液系统疾病的基因治疗；
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