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公司新闻/正文
用了那么多次CCK-8，它的原理操作你知道吗？
36 人阅读发布时间：2026-04-01 14:01
用了那么多次CCK-8，它的原理操作你知道吗？
你有没有想过
如何
一眼看出细胞的生长状况
在科学研究中
对细胞进行精确的评估至关重要！
想象一下
你正在进行一个细胞增殖实验
你如何知道细胞是否健康地增殖
或者是否受到某种药物的影响？
今天我们来探讨一种简便、高效、准确的细胞染色技术——CCK-8。
CCK-8是什么？如何帮助我们观察评估细胞的状态和行为？
CCK-8
全称Cell Counting Kit-8试剂，是一种用于细胞增殖和毒性分析的高效工具。其原理基于其独特的化学成分和反应机制。
图源网络
试剂中含有水溶性WST-8四唑盐。这种四唑盐【2-(2-甲氧基-4-硝基)-3-(4-基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2Hkandonglema-四唑单钠盐】，在与1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓（1-Methoxy PMS）这一电子载体作用下，被细胞内线粒体中的脱氢酶还原为一种高度水溶性的黄色甲瓒产物，即Formazan dye。
生成的甲瓒的浓度与活细胞数量直接相关。
因此，通过测量甲瓒物的生成量，可以准确了解细胞的增殖状态和受到的外部因素（如药物或化合物）的影响，从而进行细胞增殖和毒性的深入分析。
绕晕了？
没关系
我们只要知道它可以用来检测活细胞就可以了。
那在日常的细胞学研究中我们一般用它来做什么呢🙄？
不慌
在说怎么用CCK-8之前，我们先来准备细胞。
1、对培养好的细胞进行消化、离心、计数。
2、在96孔板中接种每孔约100μl，3-7k/孔的细胞，可做3个重复。
3、将孔板置于37℃、5% CO2、90%湿度条件下培养一段时间（细胞贴壁约需要2-4h，悬浮细胞该步骤可省）。
接下来我们可以做 👇
细胞增殖分析
① 拿出前面准备好的细胞。
② 在接种有细胞的孔内各加入10μl CCK-8溶液（或直接配置含10% CCK-8的培养基，以换液的形式加入）。
细胞毒性分析
① 拿出前面准备好的细胞。
② 向接种有细胞的孔内加入不同浓度的毒性物质（药物、化学试剂等待测物质）。将孔板放入培养箱中孵育（如6、12、24、48h，具体时间节点根据待测物质的性质和细胞的敏感性）。
③ 在接种有细胞的孔内各加入10μl CCK-8溶液（或直接配置含10% CCK-8的培养基，以换液的形式加入）。
说了半天我还是没能一眼看出细胞状态啊😣？
这不就来了👇
CCK-8检测
1、将上述加过CCK-8的孔板放入培养箱中孵育1-4h。
由于细胞种类不同，形成formazan的量也不同，如果显色较差的话，可延长培养时间，特别是血液细胞形成的formazan很少，需要的显色时间较长（5-6h）。
2、用酶标仪在450nm处测定孔板各孔的吸光度（OD值）。
计算公式：
👇
9.0 Q1
细胞存活率结果示意图
细胞抑制率结果示意图
实验孔：含有细胞的培养基、CCK-8、待测物质
对照孔：含有细胞的培养基、CCK-8、无待测物质
空白孔：不含细胞和待测物质的培养基、CCK-8
根据计算结果
细胞状态一目了然👌
注意！！
▪ 首次操作时，多做平行进行摸索，找到适当的细胞接种量和与CCK-8的最佳培养时间。
▪ 确保细胞分散均匀，保证每孔细胞数量均匀。
▪ 为减少培养基挥发误差，可在孔板四边孔中加如培养基。
▪ 加入CCK-8时，斜贴于孔壁，避免产生气泡影响测试结果。
▪ 避免CCK-8反复冻融，以减少背景值的增加。
▪ 若使用 6 孔板或 24 孔板实验，先计算每孔相应的细胞接种量，并按照每孔培养基总体积的 10% 加入 CCK-8。
▪ 如待检测物质有氧化性或还原性，可在加入CCK-8前更换新鲜培养基，以去掉待测物质的影响。如果影响比较小或者没有影响，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
▪ 若暂时不测OD值，可以在各孔中加入10μl 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，室温避光保存，可以保证OD值在24h内不发生变化。
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