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公司新闻/正文
除了红绿灯和东北大花袄还有哪些红配绿？
26 人阅读发布时间：2026-04-01 14:42
除了红绿灯和东北大花袄还有哪些红配绿？
细胞是生命的基本单元，我们常常追问
细胞是如何生长、分裂？
又是如何面对外部刺激、躲避死亡的命运？
我们追寻一个个问题的答案
话不多说
今天跟我一起来看我教你怎样轻松拿捏细胞活死状态
首先我们要介绍两个试剂
👉Calcein-AM和PI👈
Calcein-AM
Calcein-AM的结构
Calcein（钙黄绿素）本身就是一种荧光染料，但它无法穿透细胞膜。
因此，通过在calcein分子上添加acetoxymethyl ester（AM）基团，形成了Calcein-AM，增加了疏水性，使其能够轻易穿透活细胞膜。
看到这里你还记得高中时学过的细胞膜的其中之一特征是什么吗🤨
Calcein-AM结构式
Calcein-AM荧光染色原理
Calcein-AM本身不发荧光，但Calcein-AM进入活细胞后，被细胞内的酯酶剪切释放出膜非渗透性的极性分子Calcein，calcein被滞留在细胞内并发出强绿色荧光（Ex=490 nm, Em=515 nm）。
Calcein-AM水解为Calcein
Calcein-AM细胞毒性极低，适合用于活细胞染色，而且不会抑制细胞功能，如增殖和淋巴球的趋化性等。
好的，知道了针对活细胞的辨别，那死细胞怎么办？
接着看👇
由于死细胞缺乏酯酶
Calcein-AM仅用于对活细胞生存能力测试和短期标记
因此
我们还需要另外一个针对死细胞荧光探针
Propidium iodide
碘化丙啶（Propidium iodide，PI）
碘化丙啶（Propidium iodide，PI）是一种核酸染色剂，但不能穿过活细胞的细胞膜，仅能穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核
Propidium iodide，PI结构式
Propidium iodide 染色原理
PI进入细胞核后，嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光（Ex=535 nm, Em=617 nm）。因此PI仅对死细胞染色。
操作步骤
1×Assay Buffer（反应缓冲液）的配制
从低温冰箱内取出10×Assay Buffer，根据单次用量取出适量，用去离子水做10倍稀释以得到1×Assay Buffer。
1×染色工作液的配制
⌛ 先将低温保存的Calcein-AM溶液和PI溶液回至室温（20-30 min）。
⏳ 取5 µL Calcein-AM溶液和15 µL PI溶液加入5 mL 1×Assay Buffer，充分混匀得到Calcein-AM染色工作液和PI染色工作液。
注意：
❗ 第一次使用时可对母液进行分装，避免反复冻融。
❗ 由于Calcein-AM的稳定性较差，此染色工作液必须现配现用，并且在当天用完。
染色步骤
✍ 对于贴壁细胞，先用细胞刮刀或者胰酶-EDTA消化细胞后离心收集细胞。
✍ 对于悬浮细胞，直接离心收集细胞。
✍ 去上清，用1×Assay Buffer工作液充分清洗细胞2~3次，充分去除残留的酯酶活性。
✍ 用1×Assay Buffer工作液制备细胞悬液，使其密度为1×105~1×106细胞/mL。
✍ 取100 µL染色工作液加入到200 µL细胞悬液中，混匀，37℃孵育15 min（根据细胞状况可延长孵育时间）。
荧光显微镜观察
🔬 荧光显微镜下使用490 nm的激发滤片可同时观察到活细胞（黄绿色荧光）以及死细胞（红色荧光）。使用545 nm的发射滤片仅能观察到死细胞。
经过上面一通操作
来看下显微镜下看到的是什么吧
这样的👆
这样的👆
说实话除了红路灯和东北大花袄
我也只在科研界见过这么多红配绿了🤣
+86 13823169067
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